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    分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室儀器。常用于核酸、蛋白質(zhì)定量以及細(xì)菌生長的濃度。分光光度計(jì)分光光度計(jì)的簡單原理和一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,通過系列分光裝置,從而導(dǎo)致特定波長的光源,光源透過測試的樣品,部分光源被吸收,計(jì)算樣品的吸光度值,轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。核酸定量核酸定量分光光度計(jì)是頻繁使用的功能。可以溶解在緩沖定量寡核苷酸單鏈和雙鏈DNA,RNA。核酸的吸收,較高吸收峰波長260 nm。每一個(gè)核酸分子是不同的,所以轉(zhuǎn)換因子是不同的。不同類型的核酸定量,之前選擇相應(yīng)的系數(shù)。如:1 od的吸光度值50μg 毫升dsDNA,37 ssDNA毫升、40μg 毫升的RNA,30畝Olig g 毫升。后測試后的吸光度值轉(zhuǎn)換系數(shù),從而得出相應(yīng)的樣品濃度。在測試前,選擇正確的程序,輸入,和稀釋劑的體積,然后測試空白和樣品液體。然而,實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。閱讀不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者頭痛的問題。儀器的靈敏度越高,顯示的吸光度值漂移。事實(shí)上,分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理,使吸光度值在一定范圍內(nèi)變化,儀器有一定的準(zhǔn)確度和精密度。如EppendorfBiophotometer精度1.0 ?少r(1 a)所以很多變化之間的測試結(jié)果平均約1.0 ?是正常的。此外,還需要考慮物理化學(xué)性質(zhì)和核酸本身溶解核酸緩沖pH值,離子濃度,如:在測試中,離子濃度過高,也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移,因此推薦使用pH值必須降低緩沖,離子濃度,如TE,可以很好地穩(wěn)定的讀數(shù)。稀釋濃度的樣品也是不容忽視的因素:因?yàn)椴豢杀苊獾赜幸恍┪⑿×Ｗ拥臉颖?尤其是核酸樣本。這些小顆粒的存在干擾的測試結(jié)果。粒子,以減少對測試結(jié)果的影響,為核酸吸收值大于0.1,至少吸光度值在0.1 - -1.5 -較理想的。在這個(gè)范圍內(nèi),粒子的干擾相對較小,結(jié)果是穩(wěn)定的。這意味著樣品的濃度不能過高或過低(比光度測試范圍)。后操作因素,如充分混合,否則吸光度值太低,甚至消極;液體混合物不可能存在泡沫,空白沒有暫停,或嚴(yán)重的讀數(shù)漂移;必須使用相同的顏色杯測試流體和空白樣品,否則濃度差太大,選擇比例因子和樣品濃度單位一致;不能用窗口穿比色杯,樣品的體積必須滿足的要求比色杯的小體積,和其他操作項(xiàng)目。除了核酸濃度、分光光度計(jì)和顯示幾個(gè)非常重要的比率表示樣品的純度,如260 280的比率,用于評估樣品的純度,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)吸收峰是280海里。純樣品,比大于1.8(DNA)或2.0(RNA)。如果這個(gè)比率低于1.8或2.0,顯示了蛋白質(zhì)或酚醛樹脂的影響。230表示樣品的一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等純核酸260 230比大于2.0。320年的一項(xiàng)解決方案的濁度和其他干擾因素。純樣品,320年一般是0。蛋白質(zhì)定量方法(紫外)這種方法直接在280 nm波長,直接測試蛋白質(zhì)。華寶選擇公式,光度計(jì)可以直接顯示樣品的濃度,或者是選擇相應(yīng)的轉(zhuǎn)換方法,吸光度值到樣品濃度。蛋白質(zhì)測定的過程非常簡單,首先空白測試液體,然后直接測試蛋白質(zhì)。由于有一些雜質(zhì)在緩沖,一般想要消除\ \ \u201C背景\ \ \u201D信息320 nm,設(shè)置這個(gè)功能\ \ \ \ \ \u201D。類似于核酸測試,這就需要至少280的吸光度值超過0.1,1.0到1.5之間的理想線性范圍。根據(jù)樣品濃度選擇華寶實(shí)驗(yàn)公式,發(fā)現(xiàn)閱讀\ \ \u201C漂移\ \ \u201D。這是一個(gè)正?，F(xiàn)象。事實(shí)上,只要吸光度值的變化觀察到280范圍小于1 ?顯示,結(jié)果是非常穩(wěn)定的。漂移的轉(zhuǎn)換公式因?yàn)槿A寶吸光度值濃度,乘以一定的系數(shù),只要有一個(gè)小變化,吸光度值濃度可以被放大,因此結(jié)果不是很穩(wěn)定。蛋白質(zhì)定量方法直接,適用于測試比純,相對于一個(gè)單一的蛋白質(zhì)。紫外線直接比色法,定量的方法是快速、操作簡單,但平行材料易受干擾,如DNA的干擾;其他蛋白質(zhì)含量低的靈敏度更高。比色法定量蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)通常是多種化合物,是比色法的基礎(chǔ)來確定蛋白質(zhì)成分:氨基酸(如。、酪氨酸、絲氨酸),加上地下室或染料反應(yīng),生成有色物質(zhì)。有色物質(zhì)濃度直接相關(guān)的氨基酸蛋白質(zhì)反應(yīng),因此反應(yīng)蛋白濃度。比色法在BCA,布拉德福德,洛瑞,等幾種方法。洛瑞方法:早的雙縮脲反應(yīng)的基礎(chǔ)上,改進(jìn)。蛋白質(zhì)與Cu2 +反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)色的反應(yīng)物。但與雙縮脲相比,洛瑞方法靈敏度較高。缺陷是需要訂單輸入不同的反應(yīng)試劑,反應(yīng)需要的時(shí)間較長,易受影響的非蛋白物質(zhì);包含EDTA,特里同x - 100,硫酸氨物質(zhì),如蛋白質(zhì)是不適合這種方法。BCA(Bicinchoninine酸試驗(yàn))方法:這是一個(gè)相對較新的和更敏感的蛋白質(zhì)測試。分析蛋白質(zhì)在堿性溶液中反應(yīng),Cu2 +銅+ BCA后者形成螯合,形成紫色化合物,吸收峰波長562納米。這種化合物與蛋白質(zhì)濃度*,反應(yīng)之間的線性關(guān)系后化合物的形成是非常穩(wěn)定的。相對于洛瑞的方法,操作簡單,靈敏度高。但如果與勞里之間方法容易受到干擾蛋白質(zhì)和洗滌劑。布拉德福德法:這種方法的原理是與考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)蛋白質(zhì)相結(jié)合,生成有色化合物的吸收峰595海里。其大的特點(diǎn)是,靈敏度好,兩個(gè)測試方法是洛瑞,BCA 2倍;操作更簡單、更快,只需要一個(gè)反應(yīng)試劑;化合物可以穩(wěn)定1小時(shí),方便結(jié)果;一系列干擾Lowry,BCA還原劑的反應(yīng)(如。、德勤、巰基乙醇)兼容的。但對洗滌劑仍敏感。的主要缺點(diǎn)是不同的標(biāo)準(zhǔn)將導(dǎo)致相同的樣本差異的結(jié)果,沒有可比性。一些*研究人員為比色法的測定可能各種各樣的比色法測量結(jié)果是不一致的,讓人困惑,真的應(yīng)該相信什么方法嗎?由于各種方法反應(yīng)組和顯示不同的基組,所以與此同時(shí),幾種方法用于相同的樣本的樣本濃度沒有可比性。凱勒等,例如,測試人類的牛奶蛋白,結(jié)果洛瑞,BCA測量濃度明顯高于布拉德福德的顯著差異。即使相同的樣本,同樣的比色方法的選擇標(biāo)準(zhǔn)樣品,測試后的濃度也不同意。如果用洛瑞測試細(xì)胞勻漿蛋白,與BSA作為標(biāo)準(zhǔn),的濃度\ 1.34毫克/毫升,球蛋白作為標(biāo)準(zhǔn),2.64毫克\ /毫升的濃度。在選擇比色法,因此,較好的指的是測試樣品的化學(xué)成分,尋找相似的化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)。此外,比色法定量蛋白質(zhì),經(jīng)常出現(xiàn)吸光度值問題是樣本過低,導(dǎo)致測量的濃度樣品濃度與實(shí)際差距較大。關(guān)鍵問題是,反應(yīng)后的顏色有一個(gè)半衰期,因此每個(gè)比色法列出了反應(yīng)測試時(shí)間,所有的樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)樣品),必須在測試。時(shí)間太長,吸光度值小,密度減少的轉(zhuǎn)換。此外,反應(yīng)溫度、溶液的PH值等是重要的影響因素的實(shí)驗(yàn)。此外,它是非常重要的,較好使用塑料比色法。避免使用石英或玻璃杯子的顏色,因?yàn)轭伾磻?yīng)后,可以讓一個(gè)石英或彩色玻璃,并導(dǎo)致樣品吸光度值不準(zhǔn)確。細(xì)菌細(xì)胞密度(OD)600實(shí)驗(yàn)室,以確定細(xì)菌生長密度和生長時(shí)期,更多的視覺推理根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和細(xì)菌的生長密度。在實(shí)驗(yàn)中,高需求需要一個(gè)分光光度計(jì)準(zhǔn)確測定細(xì)菌細(xì)胞的密度。OD600是標(biāo)準(zhǔn)的跟蹤方法在液體培養(yǎng)微生物的增長。后沒有真菌液體培養(yǎng)空白,后定量文化包含細(xì)菌培養(yǎng)。為了確保正確操作,每個(gè)儀器都必須為每個(gè)微生物和細(xì)胞計(jì)數(shù)用顯微鏡,制作校準(zhǔn)曲線。偶爾出現(xiàn)在細(xì)菌的OD值實(shí)驗(yàn)液體負(fù)面,原因是使用了顯色培養(yǎng)基,即細(xì)菌培養(yǎng)一段時(shí)間后,和反應(yīng)介質(zhì),顏色反應(yīng)。此外,重要的是要注意,測試樣品可以不離心,使細(xì)菌懸浮狀態(tài)。重要的配件u2014u2014分光光度計(jì)比色杯比色杯根據(jù)材料分為石英玻璃,和塑料杯。根據(jù)不同的測量體積,比色杯和毛細(xì)管比色杯,etc.General試驗(yàn)定量蛋白質(zhì)、核酸和紫外線采用石英玻璃或一些,但不適合比色法。因?yàn)槿玖系姆磻?yīng)(如?？捡R斯亮藍(lán))可以使石英和玻璃著色,所以必須使用一次性塑料杯。和塑料杯不應(yīng)使用一般的紫外線范圍測試樣品。由于測試樣品數(shù)量是不同的,所以一般分光光度計(jì)制造商提供不同的體積比色杯,以滿足不同用戶的需求。已經(jīng)存在一種可用于市場目前,uv定量蛋白質(zhì)、核酸比色法也可以用于蛋白質(zhì)測定塑料杯,劑量的樣品只有50μl,比色杯單一的無菌包裝,樣品可以回收。如埃普多夫UVette嗎?塑料比色杯,是一個(gè)比色杯的市場創(chuàng)新。隨著生命科學(xué)及相關(guān)學(xué)科的發(fā)展,這類的科學(xué)實(shí)驗(yàn)和研究提出了更高的要求,分光光度計(jì)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室將是*的工具,也成為了微生物學(xué),食品,醫(yī)藥和其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)必要的設(shè)備。

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